1、檢查恒溫恒濕培養箱標識牌是否處于停用或運行狀態，檢查培養箱的使用記錄，若正常，則給培養箱掛上運行標識，即可進行操作。
2、給培養箱主箱體后背的水箱盛滿水。
3、接通培養箱控制面板上的電源開關，開關上的指示燈亮，此時培養箱溫度控制儀表與濕度控制儀表均有顯示：
溫度控制儀表“PV"行(紅色)顯示的是干球溫度測量值，即培養箱內的實際溫度，“SV"行(綠色)顯示的是試驗溫度設定值;
濕度控制儀表“PV"行(紅色)顯示的是濕球溫度測量值，即培養箱內的實際溫度，“SV"行(綠色)顯示的是濕球溫度設定值。
4、溫度、濕度的設定：
①先按一下溫度控制儀表上的功能鍵，此時，“SV"行的溫度值會閃爍，再通過按溫度控制儀表的“△"、“▽"鍵修改溫度設定值，使“SV"行的溫度值達到試驗所需的溫度值，再按“SET"確認。
②當溫度設定好后，根據試驗所需在某一干球溫度的相對濕度，查“相對濕度查算表"中數據所對應的差值，再將干球溫度減去這一差值，即得到濕度控制儀表的設定值，將按一下濕度儀表上的功能鍵，此時，“SV"行的溫度值會閃爍，再通過按溫度控制儀表的“△"、“▽"鍵修改溫度設定值，使“SV"行的溫度值達到試驗所需的溫度值，再按“SET"確認。
5、打開培養箱的加熱開關，開啟加熱，箱內鼓風電機運轉，溫度控制儀表開始控制加熱器工作。
6、待干球溫度測量值達到或接近干球溫度設定值時，打開加濕開關，濕度控制儀表開始控制加濕器工作。
7、制冷機的開啟：溫濕度設置完成后，即可根據試驗溫度、濕度和環境溫度、濕度決定是否開啟制冷機。一般原則是試驗溫度高于環境溫度10℃以上，且試驗相對濕度高于環境濕度情況下可不開制冷機。如果試驗溫度低于環境溫度，試驗相對濕度低于環境濕度時均開制冷機。
8、試驗溫度在充分穩定后，如果培養箱溫度顯示值沒有達到所需溫度設定值，可稍稍調高溫度設定值，反之則稍稍調低溫度設定值。
9、根據實際需要，是否要觀察試品，決定是否開啟照明，在一般情況下不要開啟照明燈。
10、培養箱內部自帶限溫裝置，當試驗溫度達到約60℃時，自動切斷加熱電源，此時超溫指示燈亮。
11、恒溫恒濕培養箱使用完畢后，要填寫好使用記錄。
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